CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 155
Materia: Operar equipo y Material de Laboratorio
Maestro: Doc. Víctor Manuel Alfaro
Tema: Actividad Pie de Rey
Nombre: Ávila Hernández Kenia
Grupo: 2LM
CUESTIONARIO No. 1 SEGUNDA UNIDAD
1- Es un instrumento para medir dimensiones de objetos relativamente pequeños, se atribuye al cosmógrafo y matemático portugués que se llama: R= PEDRO VERNIER
2- En que año se le atribuye el pie de rey al cosmógrafo y matemático portugués: R= 1492 – 1577
3- También se le ha llamado al pie de rey: R= Vernier o Calibrador
4- En que año se le atribuye el pie de rey al geómetra Pedro Vernier: R= 1580-1637
5-Que nombre recibe el origen del pie de rey: R=Nonio
En los recuadros siguientes ponga el número y el nombre.
1 Mordazas para medidas externas
2 Mordazas para medidas internas
3 Coliza para medida de profundidad
4 Escala con división en cm y ml
5 Escala con divisiones y en pulgada y fracción
6 Nonio para lectura de fracción de pulgada
7 Botón de deslizamiento freno
8
DESCRIPCCIONDE PIE DE REY
Consta de una regla con una escala en un extremo, sobre la cual se desliza otra destinada a indicar la medida en una escala, permite apreciar longitudes de 1/10, 1/20, 1/50 de milimetro utilizando el nonio. Mediante piezas especiales en la parte superior y un extremo, permite medir dimensiones internas y profundidades posee dos escalas: la inferior milimétrica y la superior en pulgadas Mordazas para medidas externas mordazas para para medidas interna, coliza para medida de profundidades, escala con división en pulgadas y fracción de pulgada, Nonio para la lectura de las fracciones de pulgada en que este dividido botón de deslizamiento y freno
.
viernes, 8 de mayo de 2009
PIE DE REY
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No.155
Materia: Operar Equipo Y Material de Laboratorio
Maestro: Doc. Víctor Manuel Alfaro
Tema: Investigación (Pie de Rey)
Nombre: Ávila Hernández Kenia
Grupo: 2LM
Fecha: 22/04/09
INVESTIGACION DE PIE DE REY
El Calibre también denominado cartabón de corredera, pie de rey, pie de metro o también llamado vernier, es un instrumento para medir dimensiones de objetos relativamente pequeños, desde cm hasta fracciones de milímetro c/10 de milimetro , 1/20 de milímetro , 1/50milimetros, En la escala de las pulgadas y en su nonio de 1/28 de pulgada . Es un instrumento sumamente delicado y debe maniobrarse con habilidad cuidado y delicadeza con precaución de no rayarlo ni doblarlo en especial la coliza de profundidad
Materia: Operar Equipo Y Material de Laboratorio
Maestro: Doc. Víctor Manuel Alfaro
Tema: Investigación (Pie de Rey)
Nombre: Ávila Hernández Kenia
Grupo: 2LM
Fecha: 22/04/09
INVESTIGACION DE PIE DE REY
El Calibre también denominado cartabón de corredera, pie de rey, pie de metro o también llamado vernier, es un instrumento para medir dimensiones de objetos relativamente pequeños, desde cm hasta fracciones de milímetro c/10 de milimetro , 1/20 de milímetro , 1/50milimetros, En la escala de las pulgadas y en su nonio de 1/28 de pulgada . Es un instrumento sumamente delicado y debe maniobrarse con habilidad cuidado y delicadeza con precaución de no rayarlo ni doblarlo en especial la coliza de profundidad
ACTIVIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS NO.155
MATERIA: Operar equipo y material de laboratorio
MAESTRO: Víctor Manuel Alfaro López
NOMBRE DEL ALUMNO: Ávila Hernández Kenia
TEMA: Problemas de medios de cultivo
GRUPO: 2LM
REALIZAR LOS SIGUENTES PROBLEMAS CORRESPONDIENTES A MEDIOS DE CULTIVO
1- Anotar el medio de cultivo que se nos facilita con todos los datos visibles en su etiqueta.
2- Leer cuidadosamente las instrucciones que contiene el bote de medio de cultivo
3- Rehidratar el contenido en gramos para 1000ml del cual deberá ocupar un porcentaje para rehidratar en 250 ml, 175 ml, 138 ml.
Las operaciones deben de ser con num. Básicos como. Suma, resta, multiplicación, y división para poder ejercer la regla de tres.
MEDIOS DE CULTIVO (Problemas)
Medio de cultivo Agar Verde Brillante
Método de preparación: rehidratar 58gr de medio de cultivo en un litro de agua destilada reposa 10 a 15 min. Para disolverlo por completo, esterilizando en la autoclave a 121 C (15 lbs.
Formula: gramos por litro
Aguar 20.00
Cloruro de sodio 5.0
Extracto de levadura 3.0
Lactosa 10.0
Pepton especial 10.0
Rojo de fenol 0.08
Sacarosa 10.0
Verde brillante 0.0125
1- 1000= 58gr
250 x
X= 14.5 gr. de medio de cultivo
2- 1000= 58gr
175ml X
X= 10.5 gr. de medio de cultivo
3- 1000=58gr
138 X
X= 8.004 gr. de medio de cultivo
MATERIA: Operar equipo y material de laboratorio
MAESTRO: Víctor Manuel Alfaro López
NOMBRE DEL ALUMNO: Ávila Hernández Kenia
TEMA: Problemas de medios de cultivo
GRUPO: 2LM
REALIZAR LOS SIGUENTES PROBLEMAS CORRESPONDIENTES A MEDIOS DE CULTIVO
1- Anotar el medio de cultivo que se nos facilita con todos los datos visibles en su etiqueta.
2- Leer cuidadosamente las instrucciones que contiene el bote de medio de cultivo
3- Rehidratar el contenido en gramos para 1000ml del cual deberá ocupar un porcentaje para rehidratar en 250 ml, 175 ml, 138 ml.
Las operaciones deben de ser con num. Básicos como. Suma, resta, multiplicación, y división para poder ejercer la regla de tres.
MEDIOS DE CULTIVO (Problemas)
Medio de cultivo Agar Verde Brillante
Método de preparación: rehidratar 58gr de medio de cultivo en un litro de agua destilada reposa 10 a 15 min. Para disolverlo por completo, esterilizando en la autoclave a 121 C (15 lbs.
Formula: gramos por litro
Aguar 20.00
Cloruro de sodio 5.0
Extracto de levadura 3.0
Lactosa 10.0
Pepton especial 10.0
Rojo de fenol 0.08
Sacarosa 10.0
Verde brillante 0.0125
1- 1000= 58gr
250 x
X= 14.5 gr. de medio de cultivo
2- 1000= 58gr
175ml X
X= 10.5 gr. de medio de cultivo
3- 1000=58gr
138 X
X= 8.004 gr. de medio de cultivo
INVESTIGACCION DE MEDIO DE CULTIVO ( BACTERIAS)
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS. NO.155
MATERIA: Operar Equipo Y Material de Laboratorio
MAESTRO: Víctor Manuel Alfaro .L.
TEMA: Tipos de bacterias en medios de cultivo habilitados
NOMBRE DEL ALUMNO: Avila Hernández Kenia
GRUPO: 2LM
TIPOS DE BACTERIAS EN MEDIOS DE CULTIVO HABILITADOS
Para cada bacteria cultivada para cualquier propósito es necesario proveer el ambiente bioquímico.
Los medios de cultivo son empleados para el aislamiento y mantenimiento de cultivos puros de bacterias y también son utilizadas para la identificación de acuerdo a sus propiedades físicas y bioquímicas. La mayoría de las bacterias son patógenas y requieren nutrientes complejos similares en composición de los líquidos orgánicos del cuerpo humano
ALGUNAS DE LAS ESPECIES BACTERIANAS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO HABILITADOS
- Stathy lococus quereus
-Sarcina luteo
-M. Sariatia mercences
-Microcos flavus
-M. Níger
-Choromo bacterium violaceum
MATERIA: Operar Equipo Y Material de Laboratorio
MAESTRO: Víctor Manuel Alfaro .L.
TEMA: Tipos de bacterias en medios de cultivo habilitados
NOMBRE DEL ALUMNO: Avila Hernández Kenia
GRUPO: 2LM
TIPOS DE BACTERIAS EN MEDIOS DE CULTIVO HABILITADOS
Para cada bacteria cultivada para cualquier propósito es necesario proveer el ambiente bioquímico.
Los medios de cultivo son empleados para el aislamiento y mantenimiento de cultivos puros de bacterias y también son utilizadas para la identificación de acuerdo a sus propiedades físicas y bioquímicas. La mayoría de las bacterias son patógenas y requieren nutrientes complejos similares en composición de los líquidos orgánicos del cuerpo humano
ALGUNAS DE LAS ESPECIES BACTERIANAS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO HABILITADOS
- Stathy lococus quereus
-Sarcina luteo
-M. Sariatia mercences
-Microcos flavus
-M. Níger
-Choromo bacterium violaceum
jueves, 7 de mayo de 2009
REPORTE DE PRACTICA ¨¨PESO Y MEDIDA¨¨
PRACTICA "pesos y medidas"
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS NO. 155
OPERAR EQUIPO Y MATERIAL DE LABORATORIO CLINICO
REPORTE DE PRÁCTICA:
“PESOS Y MEDIDAS”
DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ
TIJUANA B.C. A 31 DE MARZO DEL 2009.
OBJETIVO
El objetivo principal de la práctica de pesos y medidas es aprender a pesar con la balanza granatoria, sacar el peso de ciertas sustancias.
Conocer las capacidades volumétricas de los materiales de laboratorio, su uso y función checar cuanta capacidad se tienen en cada uno para sustancias solidas y liquidas.
INTRODUCCION
En el reporte se presenta algunos datos de la práctica de pesos y medidas. Durante la practica se sigue una serie de instrucciones y se van pesando material por material calculando la capacidad de cada uno con cada sustancia, ya sea solida o liquida.
INDICE
1. Objetivo…..
2. Introducción…..
3. Índice…..
4. Marco teórico…..
5. Conclusión…..
6. Ficha bibliográfica…..
7. Bitácora…..
MARCO TEORICO
“PESOS Y MEDIDAS”
Como el nombre lo dice, en la practica se baso en sacar el peso de todos los materiales de laboratorio clínico utilizados el peso es la medida de fuerza que ejerce la gravedad sobre la masa de un cuerpo. En este caso el peso de cada material. La medida es una función que asigna un numero, es decir un tamaño, un volumen o una probabilidad.
Así el peso y medida sacado fue a los siguientes materiales: vaso de precipitados, cristalizador, probeta graduada, pipeta volumétrica y graduada, pipeta Pasteur, vidrio de reloj, espátula, pipeta de Saly, caja de petri.
Al principio se pesaron y sacaron medidas solas, después se pesaron y midieron con sal y otras sustancias, dándonos cuenta del peso de la sustancia comparado con el del material solo. Fueron pesados en una balanza granataria.
CONCLUSION
Como conclusión de práctica resulto que existe una gran diferencia entre pesos y medidas, aunque se piensa que es lo mismo, no lo es, son dos cosas muy diferentes. Por que el peso es medido para masa y se representa en gr, kilogramos etc. Y la medida es basada en el volumen litros, mililitros, etc.
Y cada material de laboratorio tiene diferente capacidad en medida para contener una sustancia. Liquida o solida siempre cambia.
FICHA BIBLIOGRAFICA
WWW.WIKIPEDIA.COM
WWW.CIENCIANET.COM/MASAPESO
BITACORA
Ponernos equipo de bioseguridad : 15
Recoger Material Necesarios para la practica : 10
Pesar y Medir Material de Laboratorio: 1hora.. con 35 min
PRACTICA "pesos y medidas"
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS NO. 155
OPERAR EQUIPO Y MATERIAL DE LABORATORIO CLINICO
REPORTE DE PRÁCTICA:
“PESOS Y MEDIDAS”
DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ
TIJUANA B.C. A 31 DE MARZO DEL 2009.
OBJETIVO
El objetivo principal de la práctica de pesos y medidas es aprender a pesar con la balanza granatoria, sacar el peso de ciertas sustancias.
Conocer las capacidades volumétricas de los materiales de laboratorio, su uso y función checar cuanta capacidad se tienen en cada uno para sustancias solidas y liquidas.
INTRODUCCION
En el reporte se presenta algunos datos de la práctica de pesos y medidas. Durante la practica se sigue una serie de instrucciones y se van pesando material por material calculando la capacidad de cada uno con cada sustancia, ya sea solida o liquida.
INDICE
1. Objetivo…..
2. Introducción…..
3. Índice…..
4. Marco teórico…..
5. Conclusión…..
6. Ficha bibliográfica…..
7. Bitácora…..
MARCO TEORICO
“PESOS Y MEDIDAS”
Como el nombre lo dice, en la practica se baso en sacar el peso de todos los materiales de laboratorio clínico utilizados el peso es la medida de fuerza que ejerce la gravedad sobre la masa de un cuerpo. En este caso el peso de cada material. La medida es una función que asigna un numero, es decir un tamaño, un volumen o una probabilidad.
Así el peso y medida sacado fue a los siguientes materiales: vaso de precipitados, cristalizador, probeta graduada, pipeta volumétrica y graduada, pipeta Pasteur, vidrio de reloj, espátula, pipeta de Saly, caja de petri.
Al principio se pesaron y sacaron medidas solas, después se pesaron y midieron con sal y otras sustancias, dándonos cuenta del peso de la sustancia comparado con el del material solo. Fueron pesados en una balanza granataria.
CONCLUSION
Como conclusión de práctica resulto que existe una gran diferencia entre pesos y medidas, aunque se piensa que es lo mismo, no lo es, son dos cosas muy diferentes. Por que el peso es medido para masa y se representa en gr, kilogramos etc. Y la medida es basada en el volumen litros, mililitros, etc.
Y cada material de laboratorio tiene diferente capacidad en medida para contener una sustancia. Liquida o solida siempre cambia.
FICHA BIBLIOGRAFICA
WWW.WIKIPEDIA.COM
WWW.CIENCIANET.COM/MASAPESO
BITACORA
Ponernos equipo de bioseguridad : 15
Recoger Material Necesarios para la practica : 10
Pesar y Medir Material de Laboratorio: 1hora.. con 35 min
RECUENTO DE ERITROSITOSD EN CAMARA DE NEUBAUER
Sangre
Recuento de eritrocitos
Recuento de eritrocitos: ejemplo
Observe que en la grilla de la cámara de Neubauer las áreas de recuento de eritrocitos y linfocitos son diferentes. Los glóbulos rojos se cuentan en las áreas coloreadas de rojo, mientras que los glóbulos blancos se cuentan en las áreas coloreadas de azul. Ten en cuenta que la grilla central tiene 25 cuadrados de 1mm x 1mm de área y 0.10 mm de profundidad. El factor de dilución es por tanto de 1:200. Convierte el número de glóbulos rojos contados en 5 cuadrados a nº glóbulos rojos/µl. (1 µl (microlitro) = 1 mm3 ) Como se hace?
La imagen de abajo simula el campo que esta viendo al microscopio con un objetivo de 45x. Solo es visible el centro de la grilla. Intenta verificar esto al ir moviendo el campo de derecha-izquierda y de arriba-abajo, como si de una pletina de microscopio se tratase. Cuenta los glóbulos rojos en los cinco cuadrados mencionados anteriormente y determina el recuento de eritrocitos como se ha descrito anteriormente.. Muy importante: Cuando un eritrocito se sitúa en mitad de las líneas superior y/o de la izquierda, entonces es contabilizado. Pero no se contabiliza cuando se sitúa en mitad de las líneas inferior y/o de la derecha..
El rango normal de recuento de glóbulos rojos es el siguiente:Mujeres: 3.9-5.6 millones/µl
Hombres: 4.5-6.5 millones/µl
Determine el recuento del sujeto cuya muestra aparece en la imagen. Cual es la solución?
Técnicas de estudio de líneas celularesTÉCNICAS DE CONTAJE CELULARUna suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión como el porcentaje de éstas que son viables.Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, desde la relativamente simple cámara de contaje celular de la que existen numerosas variantes, entre ellas la que empleamos (cámara de Neubauer), hasta equipos automáticos de contaje celular como el "Cell Coulter" de la empresa Beckman-Coulter. El principio del contador celular se basa en la medida de los cambios en la resistencia eléctrica que se producen cuando una partícula no conductora en suspensión en un electrolito atraviesa un pequeño orificio. Como se puede ver en el esquema, una pequeña abertura entre los electrodos es la zona sensible a través de la que pasan las partículas que se encuentran en suspensión. Cuando una partícula atraviesa el orificio desplaza su propio volumen de electrolito. El volumen desplazado es medido como un pulso de voltaje. La altura de cada pulso es proporcional al volumen de la partícula. controlando la cantidad de la suspensión que circula a través del orificio es posible contar y medir el tamaño de las partículas. Es posible contar y medir varios miles de partículas por segundo, independientemente de su forma, color y densidad.
En la unidad de Citometría de flujo y Microscopia Confocal de los Servicios Científico-Técnicos de la Universidad de Barcelona se dispone de contadores celulares.Sin embargo, es posible determinar la densidad celular empleando métodos más sencillos. Nos basta con una cámara de contaje celular, por ej. la cámara de Neubauer, y un microscopio. Una cámara de contaje celular es un dispositivo en el que se coloca una muestra de la suspensión a medir. El dispositivo presenta unas señales que determinan un volumen conocido (x microlitros). Al contar bajo el microscopio el número de partículas presentes en ese volumen se puede determinar la densidad de partículas en la suspensión de origen. La cámara de Neubauer es una cámara de contaje adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos con una depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula como la que se ve en la imagen. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos lineas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 milimetro cuadrado. La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 milímetro, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 milímetro cúbico, es decir 0.1 microlitro.
Si contamos las cuatro áreas sombreada (L) observando un total de x células entre las cuatro áreas, la concentración en la suspensión celular será :concentración en la suspensión (células / mL) = 10000 (x/4) En la imagen puedes observar el aspecto de una de las regiones marcadas como L y que en el microscopio se ven como una cuadrícula de 16 pequeños cuadrados de 0.25 milímetros de lado. Esta imagen ha sido tomada empleando un microscopio invertido de contraste de fases.
Existen numerosos modelos de cámaras de contaje celular adaptadas a su uso en microscopía. En la imagen puedes observar una cámara de Neubauer doble, como las que usas en el laboratorio de prácticas.
Para determinar la viabilidad celular se emplean diferentes métodos. El más común es el de tinción con azul tripán. El azul tripán es un coloide que se introduce en el interior de las células que presentan roturas en la membrana. Así pues las células que aparecen en la imagen, claramente de color azul, son consideradas no viables. Asimilar células blancas, por exclusión, a células viables es un error pues por este método se sobrevalora la viabilidad de las células en la suspensión, determinando como inviables sólo aquellas con la membrana rota. Existen otros métodos de determinación de la viabilidad celular como el más preciso de la tinción con ioduro de propidio
En la red dispones de descripciones detalladas sobre como utilizar un hemocitómetro, como la propuesta por P.J. Hansen, o la detallada descripción que aporta Beckton-Dickinson, y los problemas de cálculo de parámetros celulares que plantea empleando datos obtenidos a partir de un hemocitómetro, y otros protocolos para el contaje de células (en protocol-online)- arriba - Material docente diseñado y elaborado por Manuel Reina. Última actualización : . Comentarios : mreina@ub.edu
se aseptiza el dedo con alcohol y luego se seca al aire o con algodón. Se coge entre el pulgar y el índice y se hace una punción rápida y penetrante a través de la piel de la punta del dedo con una lanceta estéril.
2. Se deshecha la primera gota de sangre y se aspira la siguiente con la pipeta de dilución perfectamente limpia y seca hasta la señal 1 o 0.5 (también puede utilizarse la pipeta de hemoglobina, de 20 microlitros). Hay que evitar la entrada de burbujas de aire, pudiendo ayudarnos de un papel de filtro para conseguir el enrasado.
3. A continuación se toma con la pipeta líquido de Hayem, isotónico con la sangre, hasta la señal 1; así, la sangre queda diluida al 1/10, si tomamos sangre hasta la señal 1, o al 1/20 si tomamos hasta 0.5. Esto es así porque el volumen de la bola de la pipeta es 100 veces superior al del capilar de la misma. (Si hemos utilizado la pipeta de hemoglobina podemos diluir su contenido en 2 o 4 ml de líquido de Hayem para obtener diluciones 1/100 o 1/200).
4. Tomamos la pipeta (o el tubo de ensayo) entre los dedos índice y pulgar y agitamos. A través de la goma de conexión con la pipeta, soplamos para despreciar las primeras gotas por corresponder al líquido que estaba en el capilar.
5. Se adapta un cubreobjetos sobre una cámara cuentaglóbulos limpia y seca y se coloca una gota en uno de los lados del cubre; esta gota penetra por capilaridad y rellena el retículo de la misma.
6. Una vez preparada la cámara se coloca sobre la platina del microscopio dejándose unos minutos en reposo para que sedimenten los glóbulos. Disponemos el condensador bajo y luz débil; enfocamos primero con el objetivo débil seco y luego se cambia al fuerte seco para proceder al recuento, que se lleva a cabo en los cuadrados pequeños del retículo marcado en color rojo. Finalizado el recuento se procede a la limpieza de la pipeta con acético 1:3, agua destilada y alcohol-éter sucesivamente.
7.El volumen de sangre en el cual se han contado las células resulta de multiplicar la profundidad de la cámara por el factor de dilución, la superficie de los cuadrados y el número de cuadrados contados. Con cámara de NEUBAUER: Superficie de 1 cuadrado grande (1/20 mm de lado): Volumen de un cuadrado grande (1/10 mm de profundidad): Si contamos "a" glóbulos rojos en "n" cuadrados pequeños, el número de glóbulos por cuadrado será a/n. Si en un volumen 1/4000 mm3 hay a/n glóbulos rojos, en 1 mm3 habrá X. Luego: siendo X el número de glóbulos rojos existentes por cada mm3 de sangre diluida. Si la sangre se diluyó a 1/100 o 1/200, habrá que multiplicar el valor X por 100 o 200 respectivamente, con lo cual obtendremos un nuevo valor, Y, que representa el número de glóbulos rojos existentes por cada mm3 de sangre (sin diluir).
Se utilizan para calcular, mediante el uso del microscopio, el número de partículas (leucocitos, hematíes, bacterias…) por unidad de voluimen de un líquido.
La cámara está constituida por una placa base de vidrio especial pareciso a un porta, su parte central se encuentra separada de los extremos por unas ranuras. en ella se encuentran las cuadrículas de recuento.
La fórmula de contaje es: partículas/mm3= partículas contadas.
Clases de cámaras:
- Neubauer improved: Es el más utilizado (9 cuadros grandes, cada 1 de 1 mm2.)
- Neubauer: La diferencia es el cuadro grande central.
- Thoma: Se utiliza solo para el recuento de eritrocitos.
- Fuchs-Rosenthal: Se utiliza habitualmente para recuento de células en líquidos orgánicos (LCR, Líquido sinovial…)
Recuento de eritrocitos
Recuento de eritrocitos: ejemplo
Observe que en la grilla de la cámara de Neubauer las áreas de recuento de eritrocitos y linfocitos son diferentes. Los glóbulos rojos se cuentan en las áreas coloreadas de rojo, mientras que los glóbulos blancos se cuentan en las áreas coloreadas de azul. Ten en cuenta que la grilla central tiene 25 cuadrados de 1mm x 1mm de área y 0.10 mm de profundidad. El factor de dilución es por tanto de 1:200. Convierte el número de glóbulos rojos contados en 5 cuadrados a nº glóbulos rojos/µl. (1 µl (microlitro) = 1 mm3 ) Como se hace?
La imagen de abajo simula el campo que esta viendo al microscopio con un objetivo de 45x. Solo es visible el centro de la grilla. Intenta verificar esto al ir moviendo el campo de derecha-izquierda y de arriba-abajo, como si de una pletina de microscopio se tratase. Cuenta los glóbulos rojos en los cinco cuadrados mencionados anteriormente y determina el recuento de eritrocitos como se ha descrito anteriormente.. Muy importante: Cuando un eritrocito se sitúa en mitad de las líneas superior y/o de la izquierda, entonces es contabilizado. Pero no se contabiliza cuando se sitúa en mitad de las líneas inferior y/o de la derecha..
El rango normal de recuento de glóbulos rojos es el siguiente:Mujeres: 3.9-5.6 millones/µl
Hombres: 4.5-6.5 millones/µl
Determine el recuento del sujeto cuya muestra aparece en la imagen. Cual es la solución?
Técnicas de estudio de líneas celularesTÉCNICAS DE CONTAJE CELULARUna suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión como el porcentaje de éstas que son viables.Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, desde la relativamente simple cámara de contaje celular de la que existen numerosas variantes, entre ellas la que empleamos (cámara de Neubauer), hasta equipos automáticos de contaje celular como el "Cell Coulter" de la empresa Beckman-Coulter. El principio del contador celular se basa en la medida de los cambios en la resistencia eléctrica que se producen cuando una partícula no conductora en suspensión en un electrolito atraviesa un pequeño orificio. Como se puede ver en el esquema, una pequeña abertura entre los electrodos es la zona sensible a través de la que pasan las partículas que se encuentran en suspensión. Cuando una partícula atraviesa el orificio desplaza su propio volumen de electrolito. El volumen desplazado es medido como un pulso de voltaje. La altura de cada pulso es proporcional al volumen de la partícula. controlando la cantidad de la suspensión que circula a través del orificio es posible contar y medir el tamaño de las partículas. Es posible contar y medir varios miles de partículas por segundo, independientemente de su forma, color y densidad.
En la unidad de Citometría de flujo y Microscopia Confocal de los Servicios Científico-Técnicos de la Universidad de Barcelona se dispone de contadores celulares.Sin embargo, es posible determinar la densidad celular empleando métodos más sencillos. Nos basta con una cámara de contaje celular, por ej. la cámara de Neubauer, y un microscopio. Una cámara de contaje celular es un dispositivo en el que se coloca una muestra de la suspensión a medir. El dispositivo presenta unas señales que determinan un volumen conocido (x microlitros). Al contar bajo el microscopio el número de partículas presentes en ese volumen se puede determinar la densidad de partículas en la suspensión de origen. La cámara de Neubauer es una cámara de contaje adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos con una depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula como la que se ve en la imagen. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos lineas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 milimetro cuadrado. La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 milímetro, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 milímetro cúbico, es decir 0.1 microlitro.
Si contamos las cuatro áreas sombreada (L) observando un total de x células entre las cuatro áreas, la concentración en la suspensión celular será :concentración en la suspensión (células / mL) = 10000 (x/4) En la imagen puedes observar el aspecto de una de las regiones marcadas como L y que en el microscopio se ven como una cuadrícula de 16 pequeños cuadrados de 0.25 milímetros de lado. Esta imagen ha sido tomada empleando un microscopio invertido de contraste de fases.
Existen numerosos modelos de cámaras de contaje celular adaptadas a su uso en microscopía. En la imagen puedes observar una cámara de Neubauer doble, como las que usas en el laboratorio de prácticas.
Para determinar la viabilidad celular se emplean diferentes métodos. El más común es el de tinción con azul tripán. El azul tripán es un coloide que se introduce en el interior de las células que presentan roturas en la membrana. Así pues las células que aparecen en la imagen, claramente de color azul, son consideradas no viables. Asimilar células blancas, por exclusión, a células viables es un error pues por este método se sobrevalora la viabilidad de las células en la suspensión, determinando como inviables sólo aquellas con la membrana rota. Existen otros métodos de determinación de la viabilidad celular como el más preciso de la tinción con ioduro de propidio
En la red dispones de descripciones detalladas sobre como utilizar un hemocitómetro, como la propuesta por P.J. Hansen, o la detallada descripción que aporta Beckton-Dickinson, y los problemas de cálculo de parámetros celulares que plantea empleando datos obtenidos a partir de un hemocitómetro, y otros protocolos para el contaje de células (en protocol-online)- arriba - Material docente diseñado y elaborado por Manuel Reina. Última actualización : . Comentarios : mreina@ub.edu
se aseptiza el dedo con alcohol y luego se seca al aire o con algodón. Se coge entre el pulgar y el índice y se hace una punción rápida y penetrante a través de la piel de la punta del dedo con una lanceta estéril.
2. Se deshecha la primera gota de sangre y se aspira la siguiente con la pipeta de dilución perfectamente limpia y seca hasta la señal 1 o 0.5 (también puede utilizarse la pipeta de hemoglobina, de 20 microlitros). Hay que evitar la entrada de burbujas de aire, pudiendo ayudarnos de un papel de filtro para conseguir el enrasado.
3. A continuación se toma con la pipeta líquido de Hayem, isotónico con la sangre, hasta la señal 1; así, la sangre queda diluida al 1/10, si tomamos sangre hasta la señal 1, o al 1/20 si tomamos hasta 0.5. Esto es así porque el volumen de la bola de la pipeta es 100 veces superior al del capilar de la misma. (Si hemos utilizado la pipeta de hemoglobina podemos diluir su contenido en 2 o 4 ml de líquido de Hayem para obtener diluciones 1/100 o 1/200).
4. Tomamos la pipeta (o el tubo de ensayo) entre los dedos índice y pulgar y agitamos. A través de la goma de conexión con la pipeta, soplamos para despreciar las primeras gotas por corresponder al líquido que estaba en el capilar.
5. Se adapta un cubreobjetos sobre una cámara cuentaglóbulos limpia y seca y se coloca una gota en uno de los lados del cubre; esta gota penetra por capilaridad y rellena el retículo de la misma.
6. Una vez preparada la cámara se coloca sobre la platina del microscopio dejándose unos minutos en reposo para que sedimenten los glóbulos. Disponemos el condensador bajo y luz débil; enfocamos primero con el objetivo débil seco y luego se cambia al fuerte seco para proceder al recuento, que se lleva a cabo en los cuadrados pequeños del retículo marcado en color rojo. Finalizado el recuento se procede a la limpieza de la pipeta con acético 1:3, agua destilada y alcohol-éter sucesivamente.
7.El volumen de sangre en el cual se han contado las células resulta de multiplicar la profundidad de la cámara por el factor de dilución, la superficie de los cuadrados y el número de cuadrados contados. Con cámara de NEUBAUER: Superficie de 1 cuadrado grande (1/20 mm de lado): Volumen de un cuadrado grande (1/10 mm de profundidad): Si contamos "a" glóbulos rojos en "n" cuadrados pequeños, el número de glóbulos por cuadrado será a/n. Si en un volumen 1/4000 mm3 hay a/n glóbulos rojos, en 1 mm3 habrá X. Luego: siendo X el número de glóbulos rojos existentes por cada mm3 de sangre diluida. Si la sangre se diluyó a 1/100 o 1/200, habrá que multiplicar el valor X por 100 o 200 respectivamente, con lo cual obtendremos un nuevo valor, Y, que representa el número de glóbulos rojos existentes por cada mm3 de sangre (sin diluir).
Se utilizan para calcular, mediante el uso del microscopio, el número de partículas (leucocitos, hematíes, bacterias…) por unidad de voluimen de un líquido.
La cámara está constituida por una placa base de vidrio especial pareciso a un porta, su parte central se encuentra separada de los extremos por unas ranuras. en ella se encuentran las cuadrículas de recuento.
La fórmula de contaje es: partículas/mm3= partículas contadas.
Clases de cámaras:
- Neubauer improved: Es el más utilizado (9 cuadros grandes, cada 1 de 1 mm2.)
- Neubauer: La diferencia es el cuadro grande central.
- Thoma: Se utiliza solo para el recuento de eritrocitos.
- Fuchs-Rosenthal: Se utiliza habitualmente para recuento de células en líquidos orgánicos (LCR, Líquido sinovial…)
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