PRACTICA # 9 AGLUTINACION EN SANGRE

Prueba de Aglutinacion en Sangre practica 9
Operar Equipo y Material de Laboratorio Clínico

Prueba de aglutinación en sangre
Practica 9

“Examen tipo sanguíneo”

El alumno debe realizar la prueba de aglutinación en sangre fresca para poder legar al análisis de tipo sanguíneo.

Materiales:

• Placa escavada de porcelana



• Palillos de madera



• Tubo de ensaye con tapón morado con anticoagulante



• Torniquete


• Jeringa hipodérmica desechable de 5 ml


• Torundas alcolizadas y secas


• Papel para mesa

• Gradilla


• Reactivos tipificadores anti A, B y D



• Pipeta Pasteur con bulbo



Desarrollo:

Técnica de venopulsion, se extrae la sangre del pliegue del brazo en un volumen de 2.5 ml para transvasarla al tubo con tapón morado que contiene anticoagulante.

Una vez que se tiene la sangre fresca se puntea en la placa escavada utilizando una pipeta Pasteur con bulbo. Ya estando la sangre en la placa escavada se le aplica una gota de reactivo tipificadores A (amarillo) B (azul) D (transparente). Se toman pedacitos de madera, se mezclan cada uno de los puntos tipificadores y se esperan a observar la reacción de aglutinación la cual se presenta como si estuviera cortada la sangre en cualquiera de los 3 puntos, ya observada la aglutinación limpiamos equipo, entregamos para resguardarlo debidamente.
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Etiquetas: Examen Tipo Sanguineo

PRACTICA #8 AGLUTINACION EN PLASMA

Prueba de Aglutinacion en Sangre practica 9
Operar Equipo y Material de Laboratorio Clínico

Prueba de aglutinación en sangre
Practica 9

“Examen tipo sanguíneo”

El alumno debe realizar la prueba de aglutinación en sangre fresca para poder legar al análisis de tipo sanguíneo.

Materiales:

· Placa escavada de porcelana




· Palillos de madera





· Tubo de ensaye con tapón morado con anticoagulante




· Torniquete




· Jeringa hipodérmica desechable de 5 ml



· Torundas alcolizadas y secas



· Papel para mesa


· Gradilla




· Reactivos tipificadores anti A, B y D




· Pipeta Pasteur con bulbo




Desarrollo:

Técnica de venopulsion, se extrae la sangre del pliegue del brazo en un volumen de 2.5 ml para transvasarla al tubo con tapón morado que contiene anticoagulante.

Una vez que se tiene la sangre fresca se puntea en la placa escavada utilizando una pipeta Pasteur con bulbo. Ya estando la sangre en la placa escavada se le aplica una gota de reactivo tipificadores A (amarillo) B (azul) D (transparente). Se toman pedacitos de madera, se mezclan cada uno de los puntos tipificadores y se esperan a observar la reacción de aglutinación la cual se presenta como si estuviera cortada la sangre en cualquiera de los 3 puntos, ya observada la aglutinación limpiamos equipo, entregamos para resguardarlo debidamente.
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Etiquetas: Examen Tipo Sanguineo


Desarrollo:




Se utiliza venopulsion de sangre fresca en volumen de 25 ml, una vez obtenida la sangre se deposita en el tubo con tapón rojo pero antes en el inicio de extracción y vaciamiento al tubo se toma el tiempo de coagulación el cual es de 1 a2 minutos hasta 5 y en algunas ocasiones hasta 8 minutos.



Ya coagulada la sangre se retirara el tapón del tubo y se depositan todos los tubos en la centrifuga para centrifugar a 1500 revoluciones por minuto. Esto nos dará como resultado separación de paquetes.



Ya tenidos paq. Sangre y plasma se requiere un tubo de ensayo vacio para transvasar el plasma exclusivamente, se trabajara en el punto en laminilla de cristal, utilizando la pipeta Pasteur para puntear.



Ya obtenido el punteo de plasma en la laminilla de cristal, se le agrega una gota de reactivo febriclin teniendo el cuidado necesario del orden de los serotipos “OHAB, brucella y Proteus” ya obtenido el proceso y orden de serotipos utilizamos pequeños pedacitos de palillos de madera y utilizar de forma individual cada uno[no utilizar el mismo palillo.



Ya mezclada la solución plasmática y reactivo febriclin realizamos pequeños movimientos de rotación y traslación.



Ya terminada esa mezcla observamos de forma macroscópica a trasluz y si obtenemos la siguiente imagen punteada quiere decir que es un prueba positiva, si no es así, si es transparente se le da el termino de homogéneo lo cual será negativa.



En la prueba que observamos el punteo o una especie de arenilla tanto macroscópicamente y microscópicamente. Nos esta indicando ya que tenemos una prueba de aglutinación y plasma y que debemos reportar.
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Investigacion de Cocos y Bacilos

Coco, tipo morfológico de bacteria. Tiene forma más o menos esférica (ninguna de sus dimensiones predomina claramente sobre las otras).
• Diplococo: estos cocos se dividen en un sólo plano formando parejas, y dan la impresión de un grano de café, entre éstos podemos citar a los meningococos y gonococos.
Algunos ocasionan enfermedades a los humanos (Ej:neumococo y estafilococo) también es causante de enfermedades como el de la meningitis, otros resultan inocuos o incluso beneficiosos.
Los cocos se dividen en:
• Diplococos: Son pares.
• Estreptococos: En cadena.
• Estafilococos: En racimo.
• Tetradas: En número de 4.
• Sarcinas: En paquetes.
Obtenido de "http://es.wikipedia.org/wiki/Coco_(bacteria)"


BACILOS: son bacterias que tienen forma de bastón, cuando se observan al microscopio.

Los bacilos se suelen dividir en:
• Bacilos Gram positivos: fijan el violeta de genciana (tinción de Gram) en la pared celular porque carecen de capa de lipopolisacárido.
• Bacilos Gram negativos: no fijan el violeta de genciana porque poseen la capa de lipopolisacárido (peptidoglicano).
Aunque muchos bacilos son patógenos para el ser humano, algunos no hacen daño, pues son los encargados de producir algunos productos lácteos como el yogurt (lactobacilos).

Ejemplos [editar]
A lo largo de la historia de la medicina y de la microbiología, según se iban descubriendo los bacilos, adoptaban el nombre del médico que los descubría, por ejemplo:
• Bacilo de Abel: Klebsiella ozaenae
• Bacilo de Achalme: B. perfrigens
• Bacilo de Aertrycke: Salmonella
• Bacilo de Bang: B. abortus
• Bacilo de Ducrey: H. ducreyi
• Bacilo de Eberth: S. typhi
• Bacilo de Hansen: M. leprae
• Bacilo de Klebs-Löffler: C. diphtherilllae
• Bacilo de Koch: M. tuberculosis
• Bacilo de Morax: Género Moraxella
• Bacilo de Yersin: Y. pestis

PRACTICA # 7 OBSERVACION MICROSCOPICA

PRACTICA No. 7 OBSERVACION MICROSCOPICA



Materiales:


- Aceite de inmersión
- Frotis terminado
- Microscopio
- Papel cubre mesa
- Observación a objetivo 100x





OBJETIVO

Que el alumno observe la Tinian ya realizada



DESARRIOLLO

1- Ya terminado la tinción se puntea una gota de aceite de inmersión sobre el portaobjetos con tinción realizada



2- Se monta sobre el microscopio para hacer la observación

3- En la observación se puede ver pequeñas bolitas con forma obaloide y de color moradas y rojizas unas muy dispersas y otras muy juntas

PRACTICA # 6 TINCION

TINCION DE GRAM


La tinción de Gram o coloración Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color violeta y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa.





PRACTICA No. 6 TINCION

MATERIALES:

1. PORTA OBJETOS CON FROTIS TERMINADO
2. MECHEROS DE BUNZEN
3. PAPEL PARA BESTIR MESA
4. ASA DE PLATINO
5. VASO DE PRECIPITADO CON AGUA DESTILADA
6. LUGOL
7. ALCOHOL
8. CRISTAL VIOLETA




DESARROLLO

• Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Este tinte (al final del procedimiento) dejará de color morado solo a las bacterias Gram positivas.
• Enjuagar con agua.
• Agregar lugol y esperar 30 segundos
• Enjuagar con agua.
• Agregar alcohol acetona y esperar 15 s
• Enjuagar con agua.
• Agregar safranina y esperar 1 min. Este tinte dejará de color rosado las bacterias Gram negativas.
• Enjuagar con agua.
Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión


Tinción:
Con violeta cristal o violeta de genciana, utilizando una cantidad suficiente de dicho colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla por completo. Se deja actuar al colorante por 1 minuto. Esta tinción de 1 minuto está dada para trabajar a una temperatura ambiente de 25 ºC.
Enjuague:
Al transcurrir el minuto, se debe enjuagar la lámina conteniendo la muestra con agua corriente. Para realizar el lavado, se debe tener en cuenta que el chorro de agua NO debe caer directamente sobre la muestra, ésta debe caer sobre la parte superior de la lámina que no contiene muestra. El chorro debe ser un chorro delgado, aproximadamente de medio a un centímetro de espesor. También el enjuague se debe realizar poniendo la lámina en posición inclinada hacia abajo... Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como mordiente yodo o lugol durante 1 minuto más.


Decoloración:
Pasado el minuto de haber actuado el mordiente, el frotis se decolora con etanol al 75 %, etanol al 95 %, acetona o alcohol-acetona, hasta que ya no escurra más líquido azul. Para esto se utiliza el gotero del frasco del decolorante. Se van añadiendo cantidades suficientes del decolorante, hasta lograr que éste salga totalmente transparente, es decir, hasta que ya no escurra más líquido azul
Lavado y secado:
Lavar con agua para quitar los residuos de decolorante y esperar que seque la lámina al aire libre o con la ayuda de la llama de un mechero de la forma anteriormente descrita.
Conclusión:


Ya terminado el proceso de tinción se deja secar para agregar aceite de inmersión y así poder observar lo obtenido.

PRACTICA No. 5 ELAVORACION DE UN FROTIS

Practica No. 5 ELAVORACION DE UN FROTIS
ELAVORACION DE UN FROTIS




El alumno de laboratorio de análisis clínicos debe realizar un frotis con el producto obtenido en las cajas petri, el cual debe ser fino y delgado pára poder realizar el proceso de tincion.

MATERIALES:

1 Cajas petri con medio de cultivo y microorganismos en desarrollo
2 Asa bacteriológica de platino
3 Mecheros de bunsen
4 Vaso de precipitado de 50ml
5 vaso de precipitado 25ml de agua destilada
6 porta objetos


DESARROLLO

1 con el asa bacteriológica se va a realizar un frotis en un portaobjetos de cristal.

2 se toma el asa bacteriológica se pone en la flama del mechero dejándola al rojo vivo para que se esterilicé, se retira del fuego, se toma una pequeña gota de agua destilada, con ella misma se extrae una pequeña muestra del material bacteriológico crecido en las cajas petri.

Unas ves teniendo este material en el asa se acude a depositarlo en el portaobjetos en su parte central.

Desplazando de izquierda a derecha el material bacteriológico hasta que quede una película delgada, una ves teniéndola verificamos con el instructor si ya esta lista para poder fijarla al calor.

Ya realizado el frotis se fija de forma directa, se toma el portaobjetos en sus partes alo largo para su transporte.

Se toma el portaobjetos de forma lateral para poderlo pasar encima de la llama nunca dejar en forma directa en la flama.

Una vez fijado el frotis queda listo para el proceso de tinción.

PRACTICA No.4 OBSERVACION MACROSCOPICA

Practica No. 4 OBSERVACION MACROSCOPICA
OBSERVACION MACROSCOPICA


El alumno realiza observacion macroscopica de las cajas petri anteriormente sembradas en las que se presenta desarrollo o crecimiento de colonias bacterianas.

MATERIALES

1 cajas petri ya con medio de cultivo elaborado
2 asa bacteriana
3 2 mecheros de bunsen
4 baso de presipitado con 25ml de agua deztilada
5 vernier o pie de rey
6 3 torundas de algodón seco
7 3torundas de algodón alcoholizadas

DESARROLLO

1 las cajas pitri ya sembradas se deposita las cajas petri en mesa de laboratorio para su observación, previamente la mesa vestida de papel blanco

2 observamos de forma microscópica los crecimientos de microorganismos en medio del cultivo anotando colores, olores, dimensión desde la mas pequeña hasta la mas grande, para ello necesitamos abrir la caja en nuestro campo de esterilización a base de los 2 mecheros

3para poder medir las colonias de microorganismos utilizaremos una herramienta de medición denominada vernier, medimos y anotamos con su prespectivo grafico

4 cada grafico debe llevar el pie de grafico o pie de foto donde nos indica la información de lo que estamos plasmando.
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PRACTICA No. 3 SIEMBRA MEDIOS DE CULTIVO

Practica No.3 SIEMBRA
SIEMBRA EN CAJAS PETRI EN FORMA DE ESTRIAS


Materiales
1 cajas petri con medio de cultivo elaborado
2 muestras de deshecho
3 asa bacteriologica
4 mecheros de bunsen
5 vasos de precipitado con agua destilada con 25ml
6 papel para cubrir mesa de laboratorio
7 papel secante
8 torundas de algodón
9 masquintape para etiquetar cajas petri alcoholizadas

Muestras de producto de desecho
1 toma de muestra (2.5ml de sangre) se deposita en el tubo de tapón rojo 2 orina (6 botes para orina)
1 portaobjeto
3 muestra de cavidad oral en espacios interdentales (hisopos)
4 agua preparada en la calle (aguas frescas)
5 raspado interdigital con portaobjetos.

Desarrollo:
Se realiza el proceso de siembra por estrías en medio de cultivo que contiene las cajas petri siendo este sólido. Se utiliza el asa bacteriológica, pasándola por el mechero y al ponerse al rojo vivo esta queda esterilizada.

Una ve esterilizada el asa se toma una pequeña gota de agua destilada y se pasa a tomar la muestra de desecho que se pretende observar esto es en 2 materiales de preferencia sólidos.

Para los materiales líquidos solo se esteriliza, se toma el producto y se aplica en la caja petri realizando una siembra en forma de estrías de los 7 tipos mostrados en el pizarrón.
Para poder sembrar una muestra de caveado de oral de espacio interdental se requiere un hisopo esterilizado, tomando la muestra del paciente en su cavidad oral y se aplica en caja petri en forma de estriado. Dentro de los 7 modelos de siembra, uno de ellos requiere varilla de cristal para poder sembrar el producto el cual séle da el nombre de siembra de dispersión.

Las cajas petri sembradas se deben depositar en la estufa de incubación a 37 grados centígrados. Durante el proceso practico debemos realizar nuestra bitácora de actividades, elaborando en 1 hoja cuadriculada para asignar cada una de la actividades enumeradas llevando secuencia en tiempos y en la cual debemos anotar fechas de trabajo realizado
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Practica No.2 TECNICA DE ESTERILIZACION
TECNICA DE EZTERILIZACION

Se esteriliza el producto a 15 libras de presión y una temperatura de 120 grados centígrados durante 20 minutos.

Una vez terminada la esterilización se deja enfriar, el producto se libera de la autoclave, se entrega a las mesas y se hará el vaciado en cajas petri.

Para el vaciado en cajas petri se requiere un campo de esterilización en la mesa con 2 mecheros para que el producto este en el centro del campo de esterilización del mechero.

11 Se utiliza el vaso de precipitado de 250 ml el cual se pasara en forma breve por el fuego, para que este esterilizado (se pasara con la boquilla abierta) séle vierte el producto con la cantidad requerida y se vacía el producto con la cantidad requerida y se vacía ala caja petri, dejándola abierta con su tapa sobrepuesta asta que se enfríe, esto se hará las veces necesarias en nado de cajas.

Ya estando sólido el medio de cultivo se tapa, se etiqueta y se deposita en el enfriador, con el nombre de la mesa, grupo, datos del medio de cultivo.